Расшифровка кпд: КПД — что это такое? Расшифровка, определение, перевод

Содержание

КПД — что это такое? Расшифровка, определение, перевод

Аббревиатура КПД расшифровывается как «коэффициент полезного действия». Этот термин пришел из механики — одного из разделов физики, но сейчас часто употребляется в разных видах деятельности. КПД определяется как отношение полезной работы к затраченной энергии. Коэффициент полезного действия не имеет размерности, но указывается обычно в процентах.

КПД используют для оценки эффективности каких-либо устройств, машин или даже человеческих усилий. В идеальных механизмах КПД = 100% или 1 (единице). Но, как известно, идеальных механизмов не существует. В реальных механизмах, применяемых на практике, полезная работа меньше полной, и поэтому КПД меньше 100%. По закону сохранения энергии невозможно получить полезной работы больше, чем затрачено энергии. Ученые умы всегда были заняты поиском максимально эффективных по КПД устройств.

Пример. Разность верхнего и нижнего уровня воды на Красноярской ГЭС составляет почти 100 метров. Каждую секунду с плотины падает по водоводу 7000 тонн воды. Поэтому полная мощность падающей воды составляет 7 миллиардов ватт. Эта вода вращает турбины, присоединенные к электрогенераторам. Полезная мощность всех 12 электрогенераторов Красноярской ГЭС соcтавляет 6 миллиардов ватт. Таким образом КПД электростанции примерно равен 85%.




Вы узнали, откуда произошло слово КПД, его объяснение простыми словами, перевод, происхождение и смысл.
Пожалуйста, поделитесь ссылкой «Что такое КПД?» с друзьями:

И не забудьте подписаться на самый интересный паблик ВКонтакте!

 

Аббревиатура КПД расшифровывается как «коэффициент полезного действия». Этот термин пришел из механики — одного из разделов физики, но сейчас часто употребляется в разных видах деятельности. КПД определяется как отношение полезной работы к затраченной энергии. Коэффициент полезного действия не имеет размерности, но указывается обычно в процентах.

КПД используют для оценки эффективности каких-либо устройств, машин или даже человеческих усилий. В идеальных механизмах КПД = 100% или 1 (единице). Но, как известно, идеальных механизмов не существует. В реальных механизмах, применяемых на практике, полезная работа меньше полной, и поэтому КПД меньше 100%. По закону сохранения энергии невозможно получить полезной работы больше, чем затрачено энергии. Ученые умы всегда были заняты поиском максимально эффективных по КПД устройств.

Пример. Разность верхнего и нижнего уровня воды на Красноярской ГЭС составляет почти 100 метров. Каждую секунду с плотины падает по водоводу 7000 тонн воды. Поэтому полная мощность падающей воды составляет 7 миллиардов ватт. Эта вода вращает турбины, присоединенные к электрогенераторам. Полезная мощность всех 12 электрогенераторов Красноярской ГЭС соcтавляет 6 миллиардов ватт. Таким образом КПД электростанции примерно равен 85%.

КПД — Районы города — Тюмень

КПД

Район КПД расположен в квадрате улиц 50 лет ВЛКСМ – Пермякова – 50 лет Октября – Одесская/Мельникайте. Аббревиатура КПД обозначает «крупнопанельное домостроение»: именно этот район стал флагманом нового типа жилья в Тюмени.

 

Инфраструктура

Достоинством района КПД является хорошо развитая социально-бытовая и транспортная инфраструктура.

Район хорошо обеспечен детскими садами, школами, есть гимназия, ТГНГУ и Медицинская академия. Для людей, ведущих здоровый образ жизни, есть возможность посещать различные спортивные комплексы и фитнес-клубы. Провести досуг также не проблема – можно сходить в кинотеатр, посетить ДК «Строитель» или просто прогуляться с детьми по уютным скверам и паркам. Большое количество различного профиля магазинов и организаций помогает жителям решить проблему поиска необходимых товаров и услуг.

На территории расположены дошкольные учреждения, школы, детские развивающие центры, спортивный комплекс «Юность», ДК «Строитель», кинотеатр «Киномакс», аптеки, поликлиники, большое количество магазинов, работает торговый центр «Привоз», рынок «Пригородный», поблизости расположен автовокзал.

 

Транспорт

Основной транспортной артерией района является улица Республики, через остановочные комплексы которой проходит большое количество автобусов и маршрутных такси, доставляющих пассажиров в любую часть нашего города.

 

Застройка

Район КПД начинал застраиваться в 60-х годах в основном кирпичными и панельными пятиэтажками «хрущевского» и «брежневского» типа. Площадь кухни в таких квартирах небольшая – всего 5-6 кв.м, но комнаты достаточно просторные – 17-19 кв. метров. Несмотря на сходство планировок и площадей «хрущевок» и «брежневок», между ними есть существенное отличие, которое зачастую является решающим фактором в выборе квартиры того или другого типа – это наличие газовой или электрической плиты. В конце 90-х годов в этом районе начали возводить дома 121-Т, 121-3Т серий, а также дома индивидуальной планировки на ул. Пржевальского. Очень красивый новый дом с витражным остеклением расположился по ул. Одесская, 44/1, где планировки квартир с «изюминкой» – есть сауны, гардеробные, санузлы с окнами, к тому же дом находится в пяти минутах ходьбы от ТГНГУ и Медицинской академии. Есть и малогабаритное жилье – пансионаты и общежития. 

КПД светильника

Поиск по названию:
Поиск по артикулу:
Поиск по тексту:
Цена:
от: до:
Выберите категорию
Все
»Лампы

»»Светодиодные лампы

»»»Замена лампы накаливания до 60 Вт.

»»»Замена ламп накаливания до 100 Вт.

»»»Замена галогенных ламп

»»»Диммируемые светодиодные лампы

»»»Мощные светодиодные лампы

»»»Декоративные лампы

»»»Лампы для холодильников и швейных машин

»»»Замена люминесцентных ламп

»»»Лампы GX53 и GX70

»»Фитолампы

»»Ретро лампы

»»Лампы 12 Вольт

»»Диско лампа

»»Лампы энергосберегающие

»»»Аналоги ламп накаливания до 60 Вт.

»»»»Теплый свет лампы

»»»»Холодный свет лампы

»»»Аналоги ламп накаливания до 100 Вт.

»»»»Теплый свет лампы

»»»»Холодный свет лампы

»»»Аналоги ламп накаливания до 500 Вт.

»»»»Теплый свет лампы

»»Лампы накаливания

»»Лампы люминесцентные

»»»Лампы Т4 люминесцентные

»»»Лампы Т5 люминесцентные

»»»Лампы Т8 люминесцентные

»»Лампы галогенные

»»»Лампы галогенные декоративные

»»»Лампы галогенные G4, GU 5.3, GU10

»»»Блоки защиты галогенных ламп

»»Лампы металлогалогенные

»»Лампы ртутные и натриевые

»Светильники

»»Светодиодные светильники LED

»»»Потолочные светодиодные светильники

»»»»Светодиодный светильник под Армстронг

»»»»Встраиваемые светодиодные светильники

»»»»Накладные светодиодные светильники

»»»»Точечные светодиодные светильники

»»»»Крепления для потолочных светильников

»»»Настольные светодиодные светильники

»»»Прожекторы светодиодные

»»»Светодиодные светильники уличного освещения

»»»Для ЖКХ

»»Для дома

»»»Потолочные светильники, люстры

»»»»Светильники под лампу накаливания

»»»»Люстры

»»»»Люминесцентные светильники

»»»Настенные светильники, бра

»»»»Светильники под лампу накаливания

»»»»Люминесцентные светильники

»»»Ночники

»»»Для ванной и туалета

»»»Для кухни

»»»Точечные светильники

»»»Настольные светильники

»»Светильники лофт

»»Диско шар

»»Для дачи

»»Для теплицы

»»Для бани и сауны

»»Для гаража и подвала

»»Для производства

»»Для офиса

»»Для склада и производства

»»Для улицы

»»»Кронштейны для уличных светильниов

»»Светильники для сада и парка

»»Для подсветки

»»Для спортивного зала

»»Для магазина

»»Переносные светильники

»»Аварийные светильники

»»Аккумуляторные светильники

»»Патроны к светильникам

»Светодиодная подсветка

»»Светодиодная подсветка потолка

»»»Светодиодная гибкая лента для помещений на самоклеющейся основе ULS-3528

»»» Светодиодная гибкая лента для помещений на самоклеющейся основе ULS-5050

»»»Светодиодная гибкая герметичная лента ULS-3528

»»»Светодиодная гибкая герметичная лента ULS-5050

»»»Драйверы для светодиодов

»»»Контроллеры для управления светодиодными источниками света

»»Светодиодная подсветка шкафа

»»Электронные трансформаторы

»Стабилизаторы напряжения

»»Однофазные стабилизаторы напряжения

»»Стабилизаторы напряжения напольные, электронные

»»Стабилизаторы напряжения настенные, релейные

»»Стабилизаторы напряжения настольные

»»Стабилизаторы напряжения электромеханические

»Низковольтная аппаратура

»»Автоматические выключатели

»»»Автоматы для проводов сечением до 25мм.

»»»»Для дома, характеристика B

»»»»Для дома, характеристика C

»»»»Для производства, характеристика D

»»»Автоматы для проводов сечением до 35мм.

»»»»Для дома, характеристика C

»»»»Для производства, характеристика D

»»»Автоматы для проводов сечением до 50мм.

»»»»Для дома, характеристика C

»»»»Для производства, характеристика D

»»»Автоматы промышленные ВА88

»»УЗО

»»Дифференциальные автоматы

»»»Серия АВДТ 63

»»»Серия АВДТ 64 с защитой

»»»Дифавтоматы АД12, АД14

»»»Серия DX

»»Разрядники, ограничители импульсных перенапряжений

»»Выключатель нагрузки (мини-рубильник)

»»Предохранители

»»»Плавкие вставки цилиндрические ПВЦ

»»»Предохранители автоматические резьбовые ПАР

»»»Предохранители ППНН

»»Контакторы

»»»Контакторы модульные серии КМ63

»»»Контакторы малогабаритные КМН

»»»Контакторы КМН в оболочке IP54

»»Пускатели ручные

»Электроустановочные изделия

»»Выключатели

»»»Выключатели внутренние

»»»Выключатели накладные

»»Розетки

»»»Розетки внутренние

»»»»Серия INARI

»»»»Серия LARIO

»»»»Серия VATTERN

»»»»Серия MELAREN

»»»»Розетки, выключатели Legrand Valena

»»»Розетки накладные

»»»»Серия SUNGARY

»»»»Серия BALATON

»»»»Серия SAIMA

»»Коробки монтажные, подрозетники

»»»Монтажные коробки для открытой проводки

»»»Монтажные коробки для скрытой проводки

»»Удлинители электрические

»»»Удлинители бытовые

»»»Удлинители силовые

»»Сетевые фильтры

»»Тройники электрические

»»Вилки электрические

»»Силовые разъёмы

»»»Вилки переносные

»»»Розетки стационарные

»»»Розетки переносные

»»»Розетки стационарные для скрытой установки

»»»Вилки стационарные

»Щитовое оборудование

»»Корпуса к щитам электрическим

»»»Для помещения

»»»»Пластиковые боксы

»»»»»Боксы пластиковые навесные

»»»»»Боксы пластиковые встраиваемые

»»»»»Бокс КМПн

»»»»Металлические корпуса

»»»»»Щиты распределительные

»»»»»Щиты учётно-распределительные

»»»»»Щиты с монтажной панелью

»»»»»Щиты этажные

»»»»Шкафы напольные

»»»»»Сборно-разборные шкафы

»»»»»Моноблочные шкафы

»»»»»Аксессуары к шкафам

»»»Для улицы IP65

»»Электрощиты в сборе

»»»Ящики с понижающим трансформатором (ЯТП)

»»»Ящики с рубильником и предохранителями (ЯРП)

»»»Ящики с блоком «рубильник-предохранитель» (ЯБПВУ)

»»»Щитки осветительные (ОЩВ)

»»Аксессуры для шкафов и щитов

»»»Шина нулевая

»»»Шина нулевая на DIN-рейку в корпусе

»»»Шина N нулевая с изолятором на DIN-рейку

»»»Шина N нулевая, в изоляторе

»»»Шина N нулевая на угловых изоляторах

»»»Шина соединительная

»»»DIN-рейки

»Фонарики

»»Фонарики налобные

»»Фонари прожекторы

»»Фонари ручные

»»Фонари кемпинговые

»»Фонари с зарядкой от сети

»»Фонари для охоты

»Провод, Кабель

»»Кабель

»»»Кабель медный NYM (3-я изоляция, еврост. )

»»»Кабель медный силовой ВВГ-нг

»»»Кабель медный силовой ВВГ

»»»Кабель алюминиевый АВВГ, АВВГп

»»»Кабель бронированный

»»Провод

»»»Провод медный

»»»Провод медный осветительный ПУНП, ПУГНП

»»»Провод монтажный

»»»Провод медный гибкий соединительный ПВС

»»»Провод медный гибкий соединительный ШВВП (ПГВВП)

»»»Провод медный установочный ПВ

»»»Провод водопогружной ( ВВП)

»»»Провод алюминиевый

»»»Провод телефонный

»»»Провод ВВП

»Звонки дверные

»»Звонки беспроводные

»»»1 звонок + 1 кнопка

»»»1 звонок + 2 кнопки

»»»2 звонка + 1 кнопка

»»»1 звонок (вилка 220В) + 1кнопка (батарейка А23)

»»Звонки проводные

»Системы для прокладки кабеля

»»Кабельные каналы

»»Гофрированные трубы

»»»Аксессуары для труб

»»Металлорукав

»»»Аксессуары для металлорукава

»»»Металлорукав в ПВХ-изоляции

»»Труба ПВХ

»»»Аксессуары для труб

»»Лотки металлические

»Климатическое оборудование

»»Тепловые пушки и вентиляторы

»»»Тепловые пушки

»»»Масляные радиаторы

»»»Тепловентиляторы электрические

»»»»Керамические обогреватели

»»»»Спиральные обогреватели

»»Охлаждаемся, климатическое оборудование

»»»Кондиционеры напольные

»Инструмент, расходные материалы

»»Инструмент

»»Изоляция

»»»Термоусаживаемая трубка ТУТнг

»»»Изолента

»»Клеммы, зажимы

»»»Строительно-монтажная клемма КБМ

»»»Зажим винтовой ЗВИ

»»»Соединительный изолирующий зажим СИЗ

»»Хомуты, скобы

»»»Лента спиральная монтажная пластиковая ЛСМ

»»»Хомут нейлон

»»»Хомут полиамид

»»»Кабельный хомут с горизонтальным замком

»»»Скоба плоская

»»»Скоба круглая

»Умный дом

»»Датчики движения

»»Дистанционное управление

»»Фотореле

Производитель:
ВсеFamettoGaladLegrandTDMUnielVolpeКМ-ПрофильРесантаРоссияСтарлайтСтройСнаб

Коэффициент полезного действия (КПД) светильника.

Часть светового потока, излучаемого лампами, поглощается внутри светильника и излучается вне угла излучения.

КПД светильника — это отношение светового потока, излучаемого в пределах угла излучения к сумме световых потоков ламп.

Высокое значение КПД дает возможность устанавливать меньшее количество светильников на единицу площади без ущерба в уровне освещенности.

В процессе эксплуатации КПД светильников снижается в зависимости от загрязнённости окружающей среды.

Световой поток светильника определяется в пределах угла излучения и имеряется в люменах. Световой поток светильника равен сумме световых потоков ламп, умноженной на KПД светильника. 

Таким образом, эффективность светильника с лампой 60 Ватт и КПД 90%, будет выше, чем от светильника с лампой 100 Ватт и КПД 40%, например. При этом энергопотребление будет ниже на 40%, соответственно.

Рекомендуем также посмотреть: 

Рассчитать освещение

Лампы ДРЛ, ДНАТ, световой поток 

Что такое уровень освещенности, Люкс 

Условные обозначения светильников 

КСС или кривая силы света 

Ассортимент светильников в нашем магазине

Крупнопанельные дома (КПД): производство изделий для строительства

Типовая планировка блок-секции
 крупнопанельных домов КПД
серии 90H-05

Основной продукцией ООО «Завод КПД-Газстрой» являются изделия крупнопанельного домостроения (КПД 90-й серии) для строительства 10-этажных домов с квартирами:

  • 1-комнатная квартира общей площадью 29,81 — 37,56 м2
  • 2-комнатная квартира общей площадью 49,60 — 55,84 м2
  • 3-комнатная общей площадью 70,49 — 73,26 м2

На сегодняшний день реализация социальных программ в области жилищного строительства не возможна без соответствующего развития крупнопанельного домостроения — наиболее экономичного, технологичного и быстровозводимого способа жилищного строительства.

Изделия КПД изготавливаются компанией в соответствии с технологическими требованиями СНиП 11-3-79 (второй у ровень теплопроводности). Наружные крупнопанельные стены (стеновые панели) представляют собой трехслойную панель-сэндвич, с использованием современного утеплителя пенополистерола. Толщина панели составляет 400 мм. Панели, изготовленные по данной технологии, могут использоваться для строительства домов кпд в северных регионах.

ООО «Завод КПД-Газстрой» выпускает следующие виды изделий для строительства крупнопанельных домов (КПД серия 90Н-05): 








Наименование ГОСТ Серия
Наружные крупнопанельные стены (стеновые панели) ГОСТ 17079-71 Серия КПД 90Н-05
Внутренние крупнопанельные стены (стеновые панели)
Панели перекрытий
Вентблоки
Шахты лифтов
Поддоны санузлов (ПД-1a)
Лестничные площадки (ЛП-6a-2, ЛП-4а-2)

 
Крупнопанельные дома, построенные из изделий КПД, произведенных на ООО «Завод КПД-Газстрой», г. Новосибирск

 

Основными преимуществами строительства крупнопанельных домов (КПД) по сравнению с кирпичным и монолитным домостроением являются:

  • быстрые сроки возведения домов (в 1,5-2 раза)
  • меньшая себестоимость строительства (на 30-40%)

Также актуально отметить наличие значимых внутренних и внешних преобразований в качестве современных крупнопанельных домов.

Новые типы стеновых соединений, современные материалы для герметизации стыков и швов, трехслойные стены (стеновые панели) и межэтажные перекрытия позволяют решать вопросы энергосбережения и водонепроницаемости, а такие обеспечить надежную звуко- и теплоизоляцию жилья.

Современные крупнопанельные дома характеризуются улучшенными планировками квартир с просторными внутренними помещениями, комфортным зонированием пространства. По внешнему виду и эксплуатационным качествам панельные дома, построенные по современным технологиям, не уступают (а по некоторым характеристикам — превосходят) дома кирпичные и монолитные.

Коэффициент полезного действия механизма — урок. Физика, 7 класс.

При использовании механизмов всегда совершается работа, превышающая работу, которая необходима для достижения поставленной цели, поэтому различают полную (или затраченную) работу — Aз и полезную работу — Aп.

Например, необходимо поднять груз массой \(m\) на высоту \(h.\)

В этом случае полезная работа затрачивается на преодоление силы тяжести, действующей на груз.

При равномерном подъёме груза эта работа может быть найдена следующим образом:

Aп=F⋅s=mg⋅h.

 

Если для подъёма груза применяют блок или какой-либо другой механизм, то,

кроме силы тяжести груза, приходится преодолевать ещё и силу тяжести частей механизма, а также действующую в механизме силу трения.

Более того, выигрывая в силе, всегда проигрывают в пути, что также влияет на работу.

Всё это приводит к тому, что совершённая с помощью механизма затрачиваемая (полная) работа всегда несколько больше полезной работы:

Aз>Aп или AпAз<1.

Отношение полезной работы к полной работе называется коэффициентом полезного действия механизма.

Сокращённо коэффициент полезного действия обозначается КПД:КПД=AпAз.

Чтобы найти КПД механизма, надо полезную работу разделить на работу, которая была затрачена при использовании данного механизма.

Обычно КПД выражают в процентах и обозначают греческой буквой «эта» — η:η=AпAз⋅100%.
 

Обрати внимание!

КПД любого механизма всегда меньше \(100%\).

Конструируя механизмы, стремятся увеличить их КПД. Для этого уменьшают трение в осях механизмов и их вес.

Источники:

Громов С.В. Физика: Учеб. для 7 кл. общеобразоват. учреждений/ Громов С. В., Родина Н. А. — 4-е изд.— М.: Просвещение, 2002.— 158 с.: ил.
Пёрышкин А. В. Физика. 7 кл.: учеб. для общеобразоват. учреждений. — 13-е изд., стереотип. — М.: Дрофа, 2009. — 192 с.: ил.

Внедрение «1С:Документооборот 8 КОРП» ОАО «Авиационный комплекс им. С. В. Ильюшина» (ОАО «Ил»)


О компании


Открытое акционерное общество «Авиационный комплекс им. С. В. Ильюшина» (ОАО «Ил»), основанное в 1933 году выдающимся авиаконструктором С. В. Ильюшиным как Опытное конструкторское бюро, является одним из ведущих предприятий России, занятых в создании сложной авиационной техники.


За 80 лет конструкторским бюро разработано более 230 и создано более 120 типов самолетов разных модификаций. За всю историю существования КБ «Ильюшин» на серийных заводах было выпущено более 60 тысяч самолетов марки «Ил». Их отличает простота конструкции, технологичность производства, высокая надежность, большой ресурс, удобное пилотирование и техобслуживание.


 Выбор продукта


«1С:Документооборот» — популярная платформа, которая обладает открытым кодом и хорошо зарекомендовала себя на российском рынке ИТ-систем. Использование системы на базе «1С» для ведения бухгалтерского учета послужили дополнительными аргументами в пользу выбора данной системы.


Организация работы


Для работы по проекту была выбрана модульная технология внедрения, предполагающая разбивку внедряемого функционала на модули и последовательное внедрение каждого из них. Всего в ходе работ внедрено 6 модулей: Входящие и исходящие документы, Организационно-распорядительные документы, Номенклатура дел, Служебные записки, Учет мероприятий, Контроль исполнения.


Описание внедрения 


1) Произведена начальная настройка системы: загружены данные о пользователях из кадровой системы, загружены справочники Контрагенты, Контактные лица, Банковские реквизиты из бухгалтерской системы;

2) Настроены виды документов:

  • входящих: Входящее письмо, Факс, Авансовый отчет, Автореферат, Акт, Аттестат, Бюллетень, Входящее без штампа, Входящее ДСП, Договор (вх), Дополнительное соглашение к договору (вх), Заключение, Извещение, Исковое заявление, Исполнительный лист, Обращение граждан, Определение, Платежное требование, Повестка, Постановление, Претензия, Приказ сторонней организации, Протокол, Распоряжение сторонней организации, Расшифровка затрат, Рекламация, Рекламный лист, Решение Ил, Свидетельство, Сертификат, Спецификация, Справка, Счет, Счет-фактура, Телеграмма, Товарная накладная, Требование, Уведомление;
  • исходящих: Акт, Договор, Извещение, Исходящее письмо, Решение, Справка, Товарная накладная;
  • внутренних: Докладная записка, Приказ Генерального директора — Главного конструктора (далее — ГД-ГК), Приказ административный ГД-ГК, Протокол правления, Прочие, Рапорт, Распоряжение ГД-ГК, Распоряжение, Распоряжение Заместителя Генерального директора — Главного конструктора, Директора по направлению, Начальника производства, Главного конструктора, Руководителя отдела, Главного специалиста, Распоряжение административное ГД-ГК, Служебная записка;


3) Настроены шаблоны видов документов;

4) Используются процессы, заложенные в стандартной поставке ПО, такие как: регистрация, рассмотрение и исполнение входящих документов, согласование, утверждение, регистрация и отправка исходящих документов, подготовка, согласование, утверждение и регистрация внутренних документов;

5) Разграничены права пользователей по группам доступа, по видам документов, по грифам доступа;

6) Настроены отчеты: Справка по исполнительской дисциплине высшего руководства, Аналитическая справка по обобщенным результатам контроля, Сводка о состоянии исполнения документов, Список руководителей, не исполнивших поручения в срок, Справка об исполнении контрольных документов;

7) Подготовлены инструкции пользователей по работе с системой;

8) Проведено обучение 320 пользователей.


В 2016 году заказчик столкнулся с крупной проблемой перерасчета прав. Устаревшая конфигурация не справлялась с большими объемами данных и обработка перерасчета прав занимала более одной недели, что сказывалось на качественной работе всей системы. Несколько раз приходилось останавливать работу всех пользователей на 5-7 дней. 



Был произведен замер скорости перерасчета прав в используемой  конфигурации и в последнем, на тот момент, релизе «1С:Документооборот 8 версии 2.1». Цифры отличались в 10 раз. Поэтому было принято решение провести обновление механизма расчета прав. В результате внедренного механизма скорость расчета прав пользователя сократилась в 8 раз.



В 2017 году был доработан и внедрен механизм подписания документов электронной подписью.


Результаты


Все документы, созданные или зарегистрированные в системе электронного документооборота, хранятся в единой информационной базе, что гарантирует сохранность документов, возможность быстрого поиска и доступа к документам. Ускорились процессы обработки документов (согласование и другие). Повысилась прозрачность учета документов и задач (на любой стадии обработки документа можно увидеть статус и ход исполнения задач и документов). Сократилось время на работу с документами, для руководителей имеется возможность контроля поставленных задач и исполнительской дисциплины сотрудников.


Дополнительная информация о внедрении


Вариант работы: Клиент-серверный (сервер базы данных: Microsoft SQL Server)

Количество одновременно работающих клиентов: 75 (тонкий клиент)

По состоянию на 01.03.2014:

Количество видов документов — 52

Количество вводимых документов в день — до 90

Объем информационной базы — 4700 МБ


Отзыв о внедрении

Подробное описание проекта в Справочнике внедренных решений фирмы «1С»

Значения пиктограмм на упаковках продукции Uniel — Uniel

Экономия энергии до 85%.

Допускается вкручивать или выкручивать лампу, только держа ее за пластмассовый цоколь.

Область применения ламп — светильники в помещениях, герметично закрытые уличные светильники, настольные светильники.

Лампы нельзя использовать в цепях с датчиками, в цепях с регуляторами напряжения (диммерами), под открытым небом.

Лампы можно использовать в цепях с датчиками, в цепях с регуляторами напряжения (диммерами).

Лампы работают при пониженном и повышенном напряжении в указанном диапазоне.

Срок службы энергосберегающей лампы в 8-12 раз превышает срок службы обычной лампы накаливания.

Срок службы галогенной лампы в 2-3 раза превышает срок службы обычной лампы накаливания.

Комфортный для глаз свет без мерцания.

Лампы SuperLux потребляют до 30% меньше электроэнергии, чем обычные энергосберегающие лампы, благодаря использованию оригинального люминофора и специальной технологии.

Энергосберегающая лампа выделяет при работе в 5 раз меньше тепла, чем обычная лампа накаливания.

Комбинация из трех типов люминофора обеспечивает приятный естественный свет.

Используется электронная система адаптивного зажигания, т. е. медленного набора мощности свечения, что увеличивает срок службы лампы. При этом с самого начала лампа дает достаточно света.

Колба лампы имеет защитное покрытие, препятствующее ультрафиолетовому излучению.

Применена специальная технология, позволяющая добиться максимальной яркости при минимальном размере.

Не содержат ртути в опасном для окружающей среды состоянии.

Применяются специальные микрокомпоненты, в том числе машинной пайки, что позволяет уменьшить размеры лампы при повышении срока службы.

Соответствует требованиям ROHS (англ. Restrictions of Hazardous Substances).

Лампы не создают электромагнитных помех другим радиоэлектронным устройствам (медицинским приборам, высокоточной измерительной аппаратуре, телерадиоаппаратуре и т.п.).

UVC (коротковолновое ультрафиолетовое излучение) отсутствует.

Значения длинно- и средневолнового ультрафиолетового излучения UVA+UVB=0,2 mW/klm — это в 10 раз меньше максимально допустимых значений.

Коэффициент класса энергии с наиболее высоким уровнем КПД. «А» — самый высокий уровень, «В» — уровень ниже и т.д. Классы от «А» до «С» считаются самыми экономичными.

Экономия до 90%.

Срок службы 30000 ч.

Не использовать с диммером.

Экологически чистый продукт.

Угол светового потока лампы/светильника.

Светильник/лампа не имеют слепящего эффекта.

Диапазон рабочих температур.

Гарантийный срок изделия.

Радиус действия пульта ДУ.

Номинальный диапазон входного напряжения стабилизатора.

Защита от доступа детей.

Антивандальное исполнение.

Для светодиодной лампы — эквивалентная мощность ЛОН.

TOWRE-2 Тест на эффективность чтения слов — второе издание, ПОЛНЫЙ НАБОР Джозеф К. Торгесен • Ричард К. Вагнер • Кэрол А. Рашотт: Официальный веб-сайт PRO-ED Inc.

Описание

Важное обновление для пользователей TOWRE-2: Руководство эксперта TOWRE-2 Страница 42 Ошибки

Возраст: От 6–0 до 24–11 лет
Время тестирования: 5–10 минут
Администрация: Индивидуальный

Тест на эффективность чтения слов (TOWRE) был первоначально опубликован в 1999 году для удовлетворения потребности в быстром и надежном способе оценки эффективности распознавания слов и фонематического декодирования у детей и взрослых. Его цель состояла в том, чтобы предоставить профессионалам в школах и клиниках надежную и достоверную оценку беглости и точности навыков чтения слов на основе печати.

С момента публикации журнал TOWRE пользуется популярностью среди специалистов в области психологии и образования. Он был отражен в более чем 200 исследовательских отчетах, посвященных различным аспектам чтения и развития речи в нормальных и клинических группах населения. Тест получил два положительных отзыва в Ежегоднике Mental Measurements Yearbook и обсуждался в многочисленных книгах и статьях, посвященных современным методам оценивания в школах и клиниках.

Изменения в TOWRE-2

Все новые нормативные данные были собраны в 2008 и 2009 годах. Демографические характеристики выборки соответствуют характеристикам населения, указанным в статистическом обзоре США, и, следовательно, являются репрезентативными. населения США.

В оба подтеста TOWRE-2 были добавлены дополнительные списки слов, так что теперь каждый из них имеет в общей сложности четыре эквивалентных формы. Это сделает тест более полезным для отслеживания прогресса и оценки воздействия учебных вмешательств.Наряду с новыми формами каждого субтеста, в руководстве представлена ​​обширная информация, необходимая для оценки образовательного и статистического значения изменений в успеваемости, которые могут происходить от одного тестирования к другому.

Руководство было тщательно отредактировано и содержит много новой информации о достоверности и надежности TOWRE-2. Данные многочисленных независимых исследований были объединены, чтобы предоставить убедительные доказательства конструктивной валидности TOWRE-2, а также его полезности при диагностической оценке детей с нарушениями чтения и другими ограниченными возможностями.Обширные данные также представлены в легкой для доступа табличной форме, чтобы показать, как каждый из подтестов TOWREà ™ â € œ2 связан с другими известными тестами навыков чтения.

Описание TOWRE-2

Тест на эффективность чтения слов — второе издание (TOWRE-2) — это мера способности человека произносить напечатанные слова (эффективность визуального слова) и фонематически обычные неслова (фонематическая Decoding Efficiency) точно и плавно. Поскольку его можно проводить очень быстро, этот тест является эффективным средством отслеживания роста двух видов навыков чтения слов, которые имеют решающее значение для развития общей способности к чтению.

Каждый из двух подтестов TOWRE-2 имеет четыре альтернативных формы, от A до D. Подтест Sight Word Efficiency (SWE) оценивает количество реальных слов, напечатанных в вертикальных списках, которые человек может точно идентифицировать в течение 45 секунд. Точно так же подтест «Эффективность фонематического декодирования» (PDE) измеряет количество произносимых неслов, представленных в вертикальных списках, которые человек может точно декодировать в течение 45 секунд. Четыре формы каждого субтеста имеют одинаковую сложность, и любая из форм каждого субтеста может быть предоставлена ​​в зависимости от целей оценки.Если используется только одна форма каждого теста, его можно провести примерно за 5 минут, включая время для указаний и практических заданий.

TOWRE-2 был нормирован на более чем 1700 человек в возрасте от 6 до 24 лет, проживающих в 12 штатах и ​​Вашингтоне, округ Колумбия. Более 700 детей в нормирующей выборке посещали начальную школу (до 5-го класса), где TOWRE-2, как ожидается, получит самое широкое применение. Средние значения коэффициентов надежности альтернативных форм (выборки контента) по субтестам превышают.90. Средние значения коэффициентов повторного тестирования (временной выборки) для той же формы превышают 0,90. Средние коэффициенты повторного тестирования (временной выборки) для различных форм субтестов составляют 0,87. Величина коэффициентов, представленных во всех исследованиях надежности, свидетельствует о небольшой ошибке измерения в TOWRE-2. Многочисленные исследования надежности и валидности, представленные в руководстве, предоставляют экзаменатору убедительные доказательства сильных и слабых сторон результатов теста.

Использование TOWRE-2 Текущая версия TOWRE широко использовалась для трех различных целей:

  1. Ранняя идентификация. TOWRE-2 можно использовать для выявления детей в младших классах начальной школы, которым потребуется более интенсивное или подробное обучение навыкам чтения слов, чтобы добиться адекватного прогресса в обучении чтению.
  2. Диагностика нарушений чтения. Этот тест также широко используется как часть набора тестов для диагностики определенных нарушений чтения у детей старшего возраста и взрослых. TOWRE-2 может использоваться либо как замена, либо как дополнение к стандартным диагностическим тестам на способность контекстно-зависимого чтения слов, которые используются в настоящее время.
  3. Исследования. С момента публикации в 1999 году TOWRE широко использовался в исследованиях в качестве быстрой и надежной оценки навыков чтения на уровне слов как в больших, так и в небольших группах исследователей.

Мы надеемся, что TOWRE-2, с созданием двух дополнительных форм тестирования (формы C и D) для каждого подтеста, будет иметь как минимум одно дополнительное применение помимо уже перечисленных. В отчете Национальной комиссии по чтению в 2000 году указано, что частый мониторинг развития основных навыков чтения важен для обеспечения эффективного обучения чтению для всех учащихся. Частая оценка навыков критического чтения также является центральным аспектом популярной модели оказания услуг «Реагирование на вмешательство». Хотя TOWRE-2 не был разработан для проведения еженедельных или ежемесячных оценок, его, безусловно, можно использовать для отслеживания прогресса в развитии навыков чтения на уровне слов три или четыре раза в год.

Полный комплект TOWRE-2 включает: Руководство экзаменатора, карточки со словами формы A, карточки со словами формы B, карточки со словами формы C, карточки со словами формы D, 25 буклетов с записями экзаменатора по форме A, 25 буклетов с записями экзаменатора по форме B и 25 буклетов «Реагирование на вмешательство» в прочном ящике для хранения.

© 2012 • Предыдущая редакция: № 8920

PAR | ТАУРЕ-2 | Тест на эффективность чтения слов – 2-е изд.

TOWRE-2 измеряет способность человека произносить напечатанные слова (то есть эффективность слов на вид) и фонематически правильные неслова (то есть эффективность фонематического декодирования), навыки, которые имеют решающее значение для развития общей способности читать.

  • Доступны четыре альтернативных и эквивалентных формы каждого субтеста, что делает тест еще более полезным для отслеживания прогресса и оценки воздействия учебных вмешательств.
  • Субтест «Эффективность визуального слова» (SWE) оценивает количество реальных слов, которые человек может точно определить в течение 45 секунд. Точно так же подтест «Эффективность фонематического декодирования» (PDE) измеряет количество произносимых неслов, которые человек может точно декодировать в течение 45 секунд.
  • Пересмотренное руководство содержит обширную новую информацию о надежности и достоверности теста.

Наборы

10179-КТ

TOWRE-2 Полный комплект

включает Руководство экзаменатора TOWRE-2; 25 форм А и 25 буклетов для записей экзаменаторов; 25 буклетов «Ответ на вопросы вмешательства»; и формы A, B, C и D словарные карточки

Руководства, книги и оборудование

10180-TM

Пособие экзаменатора TOWRE-2

Бланки и буклеты

10181-РФ

Буклеты для записей экзаменатора TOWRE-2, форма A (25 шт. )

10182-РФ

Буклеты для записей экзаменатора TOWRE-2, форма B (25 шт.)

10183-РФ

Буклеты TOWRE-2 в ответ на меры вмешательства (уп. / 25)

Примечание. Скидки по программе обучения и для аспирантов не распространяются на указанные выше товары.

(PDF) Повышение эффективности декодирования частного поиска

2 Джордж Данезис и Клаудиа Диас

Поисковая сторона предоставляет словарь терминов и соответствующий зашифрованный текст Pal-

, который является шифрованием одного (ti = E ( 1)), если должен быть сопоставлен термин

, или шифрование нуля (t0

i = E (0)), если термин не представляет интереса. Be-

причина семантических свойств безопасности криптосистемы Pallier это утечка

никакой информации о критериях соответствия.

Шифровальные тексты словаря, соответствующие терминам в документе dj

, умножаются вместе, чтобы получить gj = Qktk = E (E [Количество совпадающих терминов]).

Затем вычисляется кортеж (gj, gdj

j). Вторым членом будет шифрование

нуля (E (0)), если совпадения не было, и шифрование E (gkdj) в противном случае.

Каждый кортеж документа затем умножается на набор случайных позиций в

буфере (меньшего размера, чем количество документов), в котором все позиции

инициализируются кортежами (E (0), E (0)).Документы, которые не сопоставлены, не вносят

в изменение содержимого этих позиций в буфере (поскольку к открытым текстам добавляется ноль

), но совпадения вносят вклад.

Коллизии возникают, когда два совпадающих документа вставляются в одну и ту же позицию

в буфере. Эти коллизии можно обнаружить, добавив к документам некоторую избыточность

. Теорема выживания цвета [3] может быть использована, чтобы показать, что

вероятность того, что все копии одного документа будут перезаписаны, становится отрицательной —

значительно меньше по мере того, как количество копий и размер бункера буфера увеличиваются (предположительно

длина буфера b = 2 · l · м). Искатель может декодировать все позиции,

игнорируя коллизии и разделяя второй член кортежей на первый член

, чтобы найти документы.

3 Снижение неопределенности

Предпосылкой для более эффективных схем декодирования является уменьшение неопределенности

стороны, выполняющей декодирование. В то же время сторона, выполняющая поиск

, не должна получать никакой дополнительной информации, чем в исходной схеме. Чтобы убедиться в этом, отметим, что все модификации исходной схемы

связаны только с потоками информации от поисковой стороны обратно к соответствующей стороне, поэтому

не может внести никаких дополнительных уязвимостей в этом отношении.

Сторона, выполняющая сопоставление, предоставляет две дополнительные части информации

стороне, запросившей поиск. Сначала он должен предоставить

общее количество документов, которые были найдены (не сопоставлены, так как это формирование in-

скрыто), и сопоставление всех найденных документов с буфером

позиций, в которые они были вставлены.

На практике хорошая хэш-функция может быть согласована обеими сторонами или зафиксирована протоколом

, который, учитывая размер буферной полосы, используется для отображения

документов.Например, хеш-функция H:

[0, (s · l) −1] → [0, b −1], где bis размер буфера, s — количество документов

и l количество копий, может использоваться. Чтобы определить позицию i-й копии документа j в буфере

, достаточно вычислить H (i · j − 1).

Более общим решением для поисковой стороны было бы предоставление декодирующей стороне

нового одноразового номера, используемого для подачи на генератор псевдослучайных чисел

, используемый для выполнения любых «случайных» выборов.В этом случае необходимо соблюдать осторожность, чтобы

энергоэффективное декодирование видео с использованием статистики данных

Аннотация

Видеотрафик через Интернет быстро растет и, по прогнозам, к 2020 году составит около 82% от общего потребительского интернет-трафика. Чтобы решить эту проблему, новые стандарты кодирования видео, такие как H.265 / HEVC (высокоэффективное кодирование видео), обеспечивают лучшее сжатие. особенно при разрешении видео Full HD и выше. HEVC достигает этого с помощью различных алгоритмических методов, таких как большие размеры преобразования и более точное межкадровое предсказание.Однако эти методы увеличивают сложность программных и аппаратных видеодекодеров. В этой диссертации мы разрабатываем аппаратный чип видеодекодера, который использует статистику видео для снижения затрат энергии / пикселей несколькими способами. Например, мы используем разреженность коэффициентов преобразования, чтобы снизить затраты энергии / пикселей обратного преобразования на 29%. В предлагаемой архитектуре более крупные преобразования имеют такую ​​же стоимость энергии / пикселя, что и более мелкие преобразования, из-за их более высокой разреженности, таким образом устраняя возросшую сложность больших размеров преобразования HEVC.В качестве второго примера, в стоимости энергии / пикселя при межкадровом предсказании преобладает доступ к памяти вне кристалла. Мы исключаем доступ к внешней памяти за счет использования встроенной памяти DRAM (eDRAM). Однако банки eDRAM тратят 80% своей энергии на частые операции обновления для сохранения сохранности хранимых данных. Чтобы уменьшить энергию обновления, мы сжимаем видеоданные, хранящиеся в eDRAM, используя пространственную корреляцию между пикселями. Таким образом, неиспользуемые банки eDRAM могут быть отключены, чтобы уменьшить энергию обновления на 55%. В этой диссертации представлены результаты измерений испытательного чипа 40 нм CMOS, который может декодировать видео Full HD со скоростью 20–50 кадров в секунду, потребляя при этом всего 25–31 мВт мощности системы.Мощность системы в 6 раз ниже, чем у современных устройств, и она позволяет даже носимым устройствам с очень ограниченным энергопотреблением декодировать видео без превышения их бюджета мощности. Результат обратного преобразования может позволить будущим стандартам кодирования использовать даже большие размеры преобразования для улучшения сжатия без ущерба для энергоэффективности.

Описание

Диссертация: доктор философии, Массачусетский технологический институт, факультет электротехники и компьютерных наук, 2017.

Внесено в каталог из версии диссертации в формате PDF.

Включает библиографические ссылки (страницы 103-108).

Отдел

Массачусетский Институт Технологий. Кафедра электротехники и информатики.

Издатель

Массачусетский технологический институт

Ключевые слова

Электротехника и информатика.

Развитие декодирования слов в инструкциях по инкрементальной фонетике в прозрачной орфографии

  • Al Otaiba, S., & Фукс, Д. (2002). Характеристики детей, которые не реагируют на меры раннего обучения грамоте: обзор литературы. Лечебное и специальное образование,
    23 (5), 300–316.

    Артикул

    Google ученый

  • Bosse, M. L., & Valdois, S. (2009). Влияние объема визуального внимания на способность ребенка к чтению: перекрестное исследование. Journal of Research in Reading,
    32 (2), 230–253.

    Артикул

    Google ученый

  • Автобус, А.Г., и Ван Эйзендорн, М. Х. (1999). Фонологическая осведомленность и раннее чтение: метаанализ экспериментальных обучающих исследований. Журнал педагогической психологии,
    91 (3), 403–414.

    Артикул

    Google ученый

  • Caravolas, M., Lervåg, A., Defior, S., Seidlová Málková, G., & Hulme, C. (2013). Различные модели, но равнозначные предикторы роста чтения в непротиворечивых и непоследовательных орфографиях. Психологические науки,
    24 (8), 1398–1407.

    Артикул

    Google ученый

  • Caravolas, M., Lervåg, A., Mousikou, P., Efrim, C., Litavský, M., Onochie-Quintanilla, E., et al. (2012). Общие закономерности прогнозирования развития грамотности в разных алфавитных орфографиях. Психологические науки,
    23, 678–686.

    Артикул

    Google ученый

  • Карминес, Э.Г. и МакИвер Дж. П. (1981). Анализ моделей с ненаблюдаемыми переменными: анализ ковариационных структур. В G. W. Bohrnstedt & E. F. Borgatta (Eds.), Social Measurement (стр. 65–116). Беверли-Хиллз, Калифорния: Сейдж.

    Google ученый

  • Центральное бюро статистики [Статистическое управление Нидерландов]. (2013, 12 декабря). Получено с http://statline.cbs.nl/Statweb/publication/?DM=SLNL&PA=71822NED&D1=0-1&D2=0&D3=0&D4=04&D5=a&D6=0&D7=l&HDR=T,G2,G1,G6&STG5,G5, = G3 и VW = T

  • Чиу, М.М., и Макбрайд-Чанг, К. (2006). Пол, контекст и чтение: сравнение студентов в 43 странах. Научные исследования чтения,
    10 (4), 331–362.

    Артикул

    Google ученый

  • Колтарт, М., Растл, К., Перри, К., Лэнгдон, Р., и Зиглер, Дж. (2001). Двухмаршрутная каскадная модель визуального распознавания слов и чтения вслух. Психологическое обозрение,
    108 (1), 204–256.

    Артикул

    Google ученый

  • Комптон Д. Л. (2000). Моделирование роста навыков декодирования у первоклассников. Научные исследования чтения,
    4 (3), 219–259.

    Артикул

    Google ученый

  • Де Йонг, П. Ф., и ван дер Лейдж, А. (1999). Конкретный вклад фонологических способностей в раннее приобретение навыков чтения: результаты голландского продольного исследования латентных переменных. Журнал педагогической психологии,
    91 (3), 450.

    Артикул

    Google ученый

  • Эри, Л.С. (2005). Обучение чтению слов: теория, выводы и проблемы. Научные исследования чтения,
    9 (2), 167–188.

    Артикул

    Google ученый

  • Эри, Л. К., и Маккормик, С. (1998). Этапы изучения слов: значение для обучения с задержкой чтения и инвалидами. Reading & Writing Quarterly,
    14, 135–163.

    Артикул

    Google ученый

  • Эри, Л. К., Нунес, С. Р., Шталь, С. А., и Уиллоуз, Д. М. (2001). Систематическое обучение фонетике помогает студентам научиться читать: данные метаанализа национальной группы по чтению. Обзор исследований в области образования,
    71 (3), 393–447.

    Артикул

    Google ученый

  • Эндерс, К. К. (2010). Прикладной анализ недостающих данных . Нью-Йорк: Публикации Гилфорда.

    Google ученый

  • Георгиу, Г. К., Пападопулос, Т. К., и Кайзер, Э. Л. (2014). Различные компоненты RAN относятся к чтению в разные моменты времени. Чтение и письмо: междисциплинарный журнал,
    27 (8), 1379–1394.

    Артикул

    Google ученый

  • Гилберт, Дж. К., Комптон, Д. Л., и Кернс, Д.К. (2011). Слово и лицо влияют на точность декодирования: новый взгляд на старый вопрос. Журнал педагогической психологии,
    103, 489–507.

    Артикул

    Google ученый

  • Ху, Л. Т., и Бентлер, П. М. (1999). Критерии отсечения для индексов соответствия в анализе ковариационной структуры: обычные критерии по сравнению с новыми альтернативами. Моделирование структурным уравнением: многопрофильный журнал,
    6 (1), 1–55.

    Артикул

    Google ученый

  • Жаккар, Дж. И Ван, К. К. (1996). Подходы LISREL к эффектам взаимодействия в множественной регрессии (серия работ Университета Сейдж по количественным приложениям в социальных науках, серия No.07-114). Таузенд-Оукс, Калифорния: SAGE.

  • Йореског, К. Г., & Сёрбом, Д. (1996). Справочное руководство пользователя LISREL 8 (2-е изд.). Чикаго, Иллинойс: Международное научное программное обеспечение.

    Google ученый

  • Джуэл К. (1988). Обучение чтению и письму: продольное исследование 54 детей с первого по четвертый класс. Журнал педагогической психологии,
    80 (4), 437–447.

    Артикул

    Google ученый

  • Юул, Х., Поульсен, М., и Эльбро, К. (2014). В начале развития чтения отделяем скорость от точности. Журнал педагогической психологии,
    106 (4), 1096.

    Артикул

    Google ученый

  • Кирби, Дж. Р., Дерочерс, А., Рот, Л., и Лай, С. С. В. (2008). Продольные предикторы развития чтения слов. Canadian Psychology / Psychologie Canadienne,
    49 (2), 103–110.

    Артикул

    Google ученый

  • Кром, р., Йонген, И., Верхелст, Н., Кампхуис, Ф., и Кляйнтьес, Ф. (2010). Wetenschappelijke verantwoording DMT en AVI [Научное обоснование Трехминутный тест (DMT) и анализ форматов индивидуализации (AVI)]. Арнем: Stichting Cito Instituut for Toetsontwikkeling.

  • Landerl, K., Ramus, F., Moll, K., Lyytinen, H., Leppänen, P., Lohvansuu, K., et al. (2013). Предикторы дислексии развития в европейской орфографии различной сложности. Журнал детской психологии и психиатрии,
    54 (6), 686–694.

    Артикул

    Google ученый

  • Литтл, Т. Д. (2013). Методология социальных наук: моделирование продольных структурных уравнений . Нью-Йорк: Гилфорд Пресс.

    Google ученый

  • Мелби-Лервог, М., Листер, С. А. Х. и Хьюм, К. (2012). Фонологические навыки и их роль в обучении чтению: метааналитический обзор. Психологический бюллетень,
    138 (2), 322–352.

    Артикул

    Google ученый

  • Moll, K., Ramus, F., Bartling, J., Bruder, J., Kunze, S., Neuhoff, N., et al. (2014). Когнитивные механизмы, лежащие в основе развития чтения и правописания в пяти европейских орфографиях. Обучение и инструктаж,
    29, 65–77.

    Артикул

    Google ученый

  • Моммерс, К.Л., Верховен, Л., Кёкебакер, Э., Линден ван дер, С., Стегеман, В., и Варнаар, Дж. (2003). Veilig leren lezen [Обучение безопасному чтению]. Тилбург: Цвейсен.

  • Muthén, L.K., & Muthén, B.O. (2007). Руководство пользователя Mplus, 5 . Лос-Анджелес: Muthén & Muthén.

    Google ученый

  • Нация, К., и Сноулинг, М. Дж. (2004). Помимо фонологических навыков: более широкие языковые навыки способствуют развитию чтения. Journal of Research in Reading,
    27 (4), 342–356.

    Артикул

    Google ученый

  • Нельсон, Р., Беннер, Г. Дж., И Гонсалес, Дж. (2003). Характеристики учащихся, влияющие на эффективность лечения ранней грамотности: метааналитический обзор. Исследования и практика нарушения обучаемости,
    18 (4), 255–267.

    Артикул

    Google ученый

  • Ослунд, Э. Л., Симмонс, Д. К., Хаган-Берк, С., Квок, О. М., Симмонс, Л. Е., Тейлор, А. Б. и др. (2015). Могут ли показатели, встроенные в учебный план, предсказать дальнейшие успехи в чтении детских садов с риском нарушения чтения? Learning Disability Quarterly,
    38 (1), 3–14.

    Артикул

    Google ученый

  • Перфетти, К. А. (1992). Проблема представления при освоении чтения. В П. Б. Гофе, Л. К. Эри и Р. Треймане (ред.), Получение результатов чтения (стр. 145–174). Хиллсдейл, Нью-Джерси: Лоуренс Эрлбаум Ассошиэйтс.

    Google ученый

  • Пяста, С. Б., и Вагнер, Р. К. (2010). Развитие навыков ранней грамотности: метаанализ изучения алфавита и обучения. Reading Research Quarterly,
    45 (1), 8–38.

    Артикул

    Google ученый

  • Пауэлл Д., Плаут, Д., и Фаннелл, Э. (2006). Учится ли коннекционистская модель чтения отдельного слова PMSP читать так же, как ребенок? Journal of Research in Reading,
    29 (2), 229–250.

    Артикул

    Google ученый

  • Райдер, Дж. Ф., Танмер, У. Э., и Грини, К. Т. (2008). Явное обучение фонематической осведомленности и фонематических навыков декодирования как стратегия вмешательства для борьбы с читателями в целых языковых классах. Чтение и письмо,
    21 (4), 349–369.

    Артикул

    Google ученый

  • Сеймур, П.Х. К., Аро, М., Эрскин, Дж. М., & COST Action A8 network. (2003). Основы грамотности в европейской орфографии. Британский журнал психологии,
    94, 143–174.

    Артикул

    Google ученый

  • Доля, Д. Л. (1995). Фонологическое кодирование и самообучение: непременное условие приобретения навыков чтения. Познание,
    55, 151–218.

    Артикул

    Google ученый

  • Доля, Д. Л. (1999). Фонологическое перекодирование и орфографическое обучение: прямая проверка гипотезы самообучения. Журнал экспериментальной детской психологии,
    72, 95–129.

    Артикул

    Google ученый

  • Доля, Д. Л. (2004). Краткий обзор орфографического обучения: время и начало развития самообучения. Журнал экспериментальной детской психологии,
    87 (4), 267–298.

    Артикул

    Google ученый

  • Доля, Д. Л. (2008). Об англоцентричности текущих исследований и практики чтения: опасности чрезмерной зависимости от «необычной» орфографии. Психологический бюллетень,
    134 (4), 584.

    Статья

    Google ученый

  • Симмонс Д.К., Койн, М. Д., Квок, О., МакДонах, С., Харн, Б. А., и Камеэнуи, Э. Дж. (2008). Индексирование ответа на вмешательство: продольное исследование риска чтения с детского сада до третьего класса. Журнал нарушений обучаемости,
    41 (2), 158–173.

    Артикул

    Google ученый

  • Спектор, Дж. Э. (2005). Нестабильность подтипов двойного дефицита среди первоклассников из группы риска. Психология чтения,
    26 (3), 285–312.

    Артикул

    Google ученый

  • Steiger, J.Х. и Линд Дж. К. (1980, май). Статистически тестов на количество общих факторов. Документ, представленный на ежегодном весеннем собрании психометрического общества, Айова-Сити, Айова.

  • Табачник Б. Г. и Фиделл Л. С. (2014). Использование многомерной статистики . Бостон: Pearson Education Limited.

    Google ученый

  • Вэссен, А., Бертран, Д., Тот, Д., Чепе, В., Файска, Л., Рейс, А., и др. (2010). Когнитивное развитие беглого чтения слов качественно не отличается между прозрачной и непрозрачной орфографией. Журнал педагогической психологии,
    102 (4), 827.

    Артикул

    Google ученый

  • Ван ден Боер, М., де Йонг, П. Ф., и Хентдженс-ван Митерен, М. М. (2013). Моделирование эффекта длины: определение отношения с визуальными и фонологическими коррелятами чтения. Научные исследования чтения,
    17 (4), 243–256.

    Артикул

    Google ученый

  • Верхувен, Л., & Leeuwe, J. Van. (2008). Прогнозирование развития понимания прочитанного: продольное исследование. Прикладная когнитивная психология,
    22, 407–423.

    Артикул

    Google ученый

  • Верховен, Л., и Ван Леув, Дж. (2009). Моделирование роста навыков декодирования слов: данные с голландского языка. Научные исследования чтения,
    13 (3), 205–223.

    Артикул

    Google ученый

  • Verhoeven, L., & Vermeer, A. (1986). Taaltoets allochtone kinderen [Языковой тест для детей из числа этнических меньшинств].Тилбург: Uitgeverij Zwijsen.

  • Вагнер, Р. К., Торгесен, Дж. К., Рашотт, К. А., Хехт, С. А., Баркер, Т. А., Берджесс, С. Р. и др. (1997). Изменение отношений между способностями фонологической обработки и чтением на уровне слов по мере того, как дети развиваются от начинающих до квалифицированных читателей: 5-летнее лонгитюдное исследование. Психология развития,
    33 (3), 468.

    Артикул

    Google ученый

  • Уайтхерст, Г.Дж. И Лониган К. Дж. (2001). Эмерджентная грамотность: Развитие от предварительных читателей до читателей. В С. Б. Нойман и Д. К. Дикинсон (ред.), Справочник по раннему исследованию грамотности (том 1, стр. 11–29). Нью-Йорк: Гилфорд Пресс.

    Google ученый

  • Яден, Д. Б., Роу, Д. В., и МакГилливрей, Л. (1999). Эмерджентная грамотность: полифония точек зрения . Анн-Арбор: Центр улучшения навыков чтения в раннем возрасте, Мичиганский университет.

    Google ученый

  • Ziegler, J.C., Bertrand, D., Tóth, D., Csépe, V., Reis, A. , Faísca, L., et al. (2010). Глубина орфографии и ее влияние на универсальные предикторы чтения кросс-языкового исследования. Психологические науки,
    21 (4), 551–559.

    Артикул

    Google ученый

  • Ziegler, J. C., & Goswami, U.(2005). Приобретение навыков чтения, дислексия развития и умелое чтение на разных языках: психолингвистическая теория размера зерна. Психологический бюллетень,
    131 (1), 3.

    Статья

    Google ученый

  • Циглер, Дж. К., и Госвами, У. (2006). Научиться говорить на разных языках: похожие проблемы, разные решения. Наука о развитии,
    9 (5), 429–436.

    Артикул

    Google ученый

  • IRJET-Запрошенная вами страница не найдена на нашем сайте

    IRJET приглашает статьи из различных инженерных и технологических дисциплин для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021)

    Отправить сейчас


    IRJET, выпуск 8 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Обзор статей


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    IRJET приглашает специалистов по различным инженерным и технологическим дисциплинам, научным дисциплинам для Тома 8, выпуск 2 (февраль-2021 г.)

    Отправить сейчас


    IRJET Vol-8, выпуск 2, февраль 2021 г. Публикация продолжается …

    Просмотр Статьи


    IRJET получил «Импакт-фактор научного журнала: 7,529» за 2020 год.

    Проверить здесь


    IRJET получил сертификат регистрации ISO 9001: 2008 для своей системы менеджмента качества.


    Эффективное декодирование триплета UAG как полноценного смыслового кодона увеличивает рост prfA-дефицитного штамма Escherichia coli

    ВВЕДЕНИЕ

    Большинство организмов, от Escherichia coli до человека, используют «универсальный» генетический код. который предположительно был установлен у предков всех организмов. Код не менялся за миллиарды лет, за исключением редких отклонений, установленных в митохондриях и ядерных геномах некоторых организмов (23, 31).Тройки UAA и UAG, которые в универсальном коде означают «остановка трансляции», определяют глутамин в ядерном коде инфузорий, UGA определяет триптофан в эубактерии Mycoplasma (34), а кодон «лейцин» CUG в первую очередь определяет серин в некоторые дрожжи (15, 28, 32). Развитие этих отклонений — медленный эволюционный процесс, устанавливаемый на протяжении десятков и сотен тысяч лет (16). Есть две теории, объясняющие появление таких неканонических кодов. Теория «Осава и Джукс» предполагает, что кодон, подлежащий переопределению, сначала исчезает из генома, а затем снова появляется в новом значении (22). Другая теория предполагает статус «неоднозначного» декодирования, при котором кодон, подлежащий переопределению, приобретает второе значение, в то же время сохраняя исходное значение (29). Затем геном организма постепенно адаптируется к новому значению, и исходное значение в конечном итоге благополучно теряется. Оба сценария предполагают накопление большого количества мутаций в геноме до события переназначения кодона.

    Ранее нами удалось переназначить стоп-триплет янтарного UAG в качестве смыслового кодона в E.coli, экспрессируя тРНК, декодирующую UAG, и нокаутируя ген prfA , который кодирует фактор высвобождения 1 (RF-1) (18). RF-1 является важным клеточным компонентом, распознающим UAG для прекращения трансляции, и его удаление из клетки должно быть летальным (26, 30). Чтобы избежать этой летальности, мы сконструировали концы UAA для семи основных открытых рамок считывания (ORF), заканчивающихся UAG, и ввели их в E. coli, оставив оставшиеся 300 стоп-триплетов UAG нетронутыми в геноме. Экспрессия тРНК, декодирующей UAG, также была необходима, чтобы избежать летальности.Новое значение UAG соответствует аминокислотной специфичности этой тРНК, и, таким образом, триплет переназначен на глутамин, тирозин и различные неприродные аминокислоты (18, 19). Штамм E. coli без prfA , называемый RFzero, представляет собой лабораторную модель эволюции генетического кода.

    Наиболее очевидный фенотип RFzero заключается в том, что он не растет так быстро, как родительский штамм. Было два возможных эффекта переназначения UAG на молекулярном уровне. Во-первых, характеристики тРНК, декодирующей UAG, и родственной ей аминоацил-тРНК синтетазы (aaRS) не оптимизированы для трансляции UAG.Следовательно, эффективность переназначенной трансляции кодонов UAG должна быть ниже, чем эффективность трансляции других смысловых кодонов. Во-вторых, трансляция ORF на конце UAG должна происходить ниже UAG, и ожидается, что их продукты будут содержать дополнительные C-концевые пептиды. В настоящем исследовании мы показали, что повышение эффективности трансляции UAG увеличивает рост RFzero. Облегченная экспрессия продуктов удлиненного гена оказывала благоприятное воздействие на рост. Их экспрессия предполагает наличие второго стоп-триплета, UAA или UGA, после UAG.Результаты предполагают, что геном E. coli подготовился к переопределению UAG с большинством ORF, заканчивающихся UAG, за которыми следуют такие «резервные» стоп-триплеты.

    МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

    Штаммы и плазмиды. HST08 и Dh20B были приобретены у TaKaRa Bio Inc. (Оцу, Япония) и Invitrogen (Карлсбад, Калифорния) соответственно. Штаммы RFzero, транслирующие UAG в неприродные аминокислоты, были описаны ранее (19). Среду Лурия-Бертани (LB) готовили с использованием бульона LB (Miller), приобретенного в Nacalai Tesque (Киото, Япония).Предварительно смешанные минимальные средние соли М9 были приобретены в MP Biomedical Japan (Токио, Япония). Минимальная среда, использованная в этом исследовании, содержала соли M9, сульфат магния (1 мМ) и глицерин (0,5%, вес / объем). Оптическую плотность клеточных культур измеряли на спектрофотометре Ultrospec (GE Healthcare, Chalfont St. Giles, United Kingdom). Янтарные мутантные гены хлорамфениколацетилтрансферазы cat (3amb) и cat (10amb) были ранее клонированы в pACYC184-kan, устойчивом к канамицину производном pACYC184 (18).Три кодона глутамина, оставшиеся в cat (10amb), были заменены UAG для создания cat (13amb), и полученная плазмида была обозначена pCAT (13amb). Гены SucB (UAA) и SucB (CAG) были клонированы ниже гена bla в pBR322 для транскрипции с промотора bla , и полученные плазмиды были названы pBRsucB (UAA) и pBRsucB (CAG). , соответственно. Оперон sdhCDAB SucABCD был клонирован в плазмиде pAp105, производной pAp102 (27) с геном устойчивости к канамицину вместо bla , для создания pApsucB.Кодирующая последовательность excB в плазмиде была заменена на SucB , SucB (UAA) и SucB (CAG), каждая из которых на N-конце помечена пептидом FLAG (DYKDDDDK), для создания pApsucB, pApsucB ( UAA) и pApsucB (CAG) соответственно. Ген yaeJ был клонирован между промотором lpp и терминатором, вставленным в pAp105 и pApsucB для создания pApyaeJ и pApsucB-yaeJ, соответственно. Двойной UAG на конце excB на pApsucB-yaeJ был заменен на UAA и двойной CAG для создания pApsucB (UAA) -yaeJ и pApsucB (CAG) -yaeJ, соответственно.«Фиксированные» гены prfB и prfB * клонировали в pAp105 вместе с вышестоящей последовательностью, начиная сразу после ORF recJ , для создания pApnPrfBf и pApnPrfB * соответственно. Эти гены с вышестоящей последовательностью также клонировали после гена устойчивости к канамицину pAp105 для создания pApkPrfBf и pApkPrfB * соответственно. Плазмида pACYC-TRX-GSTam, несущая ген, кодирующий гибридный белок тиоредоксина и глутатион S -трансферазы (GST) в этом порядке, с триплетом UAG в начале GST, была описана ранее (18).

    Строительство библиотеки Supe последовательности тРНК variants.The, содержащей tyrT промотор, TTCTCAACGTAACACTTTACAGCGGCGCGTCATTTGATATGATGCGCCCCGCTTCCCGATAAGGGAGCAGGCCAGTAAAAAGGAT, и последовательность, содержащую rrnC терминатор, AAATTTTTGATCCTTAGCGAAAGCTAAGGATTTTTTTTATCGCGA, были соединены друг с другом с помощью последовательности распознавания BstXI (CCATCAGATTGG) и затем вставляли между сайтами SphI и SalI вектора pACYC184-kan, несущего cat (3amb), для создания плазмиды pKS3 cat (3amb). Двухцепочечная молекула ДНК, кодирующая последовательность случайного образом мутагенеза Supe тРНКа была построена путем отжига три олигомеров со следующими последовательностями: CGCATT TGGGGTATCGCCAAGCGGTAAGGCACCGNNNNCTANNNNCGGCATTCCGAGGTTCGAATCCTCGTACCCCAGCCA TTTATCACAGA (OLG1), TGATAAA TGGCTGGGGTACGAGGATTCGAACCTCGGAATGCCG (OLG2) и CGGTGCCTTACCGCTTGGCGATACCCCA AATGCGTCTG (OLG3). В этих последовательностях N представляет собой любое из четырех оснований, а выделенные курсивом буквы представляют нуклеотиды за пределами кодирующей последовательности тРНК.Перед отжигом олигомеры OLG1 и OLG2 (200 пмоль каждый) отдельно фосфорилировали на 5′-конце в 20-мкл реакционной смеси, содержащей 50 мМ трис-HCl (pH 8,0), 10 мМ MgCl 2 , 10 мМ 2- меркаптоэтанол, 4,7 мМ АТФ и полинуклеотидкиназа Т4 (10 единиц) при 37 ° C в течение 30 мин. Эти олигомеры смешивали вместе, и затем к смеси добавляли OLG3 (200 пмоль). Отжиг проводился при 94 ° C в течение 0,5 мин, 80 ° C в течение 1 минуты, 74 ° C в течение 1 минуты, 65 ° C в течение 0,5 минут и 55 ° C в течение 1 минуты в указанном порядке с использованием термоциклера Veriti ( Applied Biosystems Japan, Tokyo, Japan), и таким образом была образована двухцепочечная молекула ДНК с разрывом в «матричной» цепи. Разрыв соответствовал антикодоновой части и восьми соседним рандомизированным нуклеотидам на неэлементной цепи, и он должен быть заполнен клеточной ДНК-полимеразой после трансформации. Отожженные олигомеры очищали центрифугированием через колонку MicroSpin S200-HR (GE Healthcare) для удаления АТФ и лигировали с плазмидой pKS3 cat (3amb), расщепленной BstXI, для клонирования вариантного гена ниже промотора tyrT . . Dh20B без супрессорной тРНК трансформировали продуктами лигирования.Таким образом, была создана библиотека, состоящая из 2 × 10 7 клонов на планшете LB, содержащем канамицин (30 мкг / мл). Всего 23 клона были подвергнуты анализу последовательности, и 15 из них (65%) содержали полные последовательности тРНК, тогда как в других либо отсутствовала вся последовательность тРНК, либо отсутствовали нуклеотиды в рандомизированной области. Анализ частот встречаемости четырех оснований в каждой позиции показал, что они одинаково представлены в рандомизированной области.

    Хромосомная инженерия. Гомологичная рекомбинация, которой способствуют ферменты рекомбинации бактериофага λ (20, 21), была использована для модификации хромосомы E. coli. Замену гена glnX на cat в HST08 и разрушение prfA геном устойчивости к зеоцину проводили, как описано ранее (18). Мы аналогичным образом заменили supE3 и supE7 на сбитый cat в локусе supE и cat на supE .Обогащение клеток, чувствительных к хлорамфениколу, проводили, как описано ранее (10). Хромосомную ДНК получали с использованием GenTLE (TaKaRa Bio) для анализа последовательности.

    Продукция GST. Мутантный ген gst (6amb) экспрессировали из плазмиды pTacGST (6Am) (18). Все эти кодоны UAG были заменены на CAG для создания gst (6gln), который экспрессировался из pTacGST (6gln). Экспрессию gst (6amb) и gst (6gln) индуцировали добавлением изопропил-β-d-тиогалактопиранозида (Naclai Tesque) до конечной концентрации 1 мМ. Равные объемы клеточных культур получали из RFzero-q, -q3 и -q7 через 4 часа после индукции. Активность GST анализировали с использованием модуля обнаружения GST (GE Healthcare). В этот модуль было включено антитело против GST.

    Анализ экспрессии SucB . Клетки, трансформированные pApsucB и pApsucB-yaeJ и их производными, выращивали при 37 ° C в 100 мл среды LB, содержащей 15 мг / л канамицина, и собирали из аликвоты 50 мл культура после инкубации в течение ночи.Измеряли влажную массу собранных клеток. Такие же количества клеток лизировали и анализировали электрофорезом в SDS-полиакриламидном геле с последующим вестерн-блоттингом с антителом против пептида FLAG.

    Выделение быстрорастущего RFzero.RFzero-py представляет собой штамм RFzero на основе BW25113, транслирующий UAG в производные лизина, включая N ε -аллилоксикарбонил-1-лизин, как описано ранее (19). Этот штамм выращивали в LB с добавлением аналога α-гидроксикислоты N ε — ( трет -бутоксикарбонил) -1-лизина, коммерчески синтезируемого Shinsei Chemical Co. Ltd. (Осака, Япония) в концентрации 10 мг / л при 37 ° C. Плазмида экспрессии мутантного гена GST с янтарным кодоном в положении 25 была описана ранее (10). Масс-спектрометрию проводили с использованием спектрометра Voyager DE-STR (Applied Biosystems, Inc.).

    РЕЗУЛЬТАТЫ

    Выделение вариантов тРНК supE , демонстрирующих повышенную активность супрессии янтаря. Ранее нами был создан нокаутный штамм prfA , который транслирует UAG как глутамин, на основе HST08, штамма K-12, экспрессирующего тРНК-супрессор янтаря Gln (18).Созданный штамм получил название RFzero-q (таблица 1). Янтарная супрессорная тРНК Gln или supE тРНК кодируется мутантным геном glnX с мутацией supE44 в RFzero-q. Эта мутация представляет собой переход G-to-A в третьем положении антикодона тРНК 2 Gln (9), который изменяет кодонную специфичность тРНК с кодона глутамина CAG на янтарный стоп-триплет UAG. RFzero-q может экспрессировать мутантный ген хлорамфениколацетилтрансферазы (CAT), cat (10amb), несущий кодоны UAG вместо 10 кодонов глутамина (18). Уровень устойчивости к хлорамфениколу (Cm), придаваемый cat (10amb), ниже, чем у гена cat дикого типа. Это наблюдение показало, что тРНК supE по-прежнему транслирует UAG менее эффективно в отсутствие RF-1 по сравнению с тРНК Gln трансляцией кодонов глутамина. Трансляция тРНК в основном включает две различные активности: аминоацилирование и распознавание кодонов. По имеющимся данным, изменение основания в третьем положении антикодона тРНК Gln вызывает умеренное снижение активности аминоацилирования (8, 13).Вместо создания глутамил-тРНК синтетазы (GlnRS) для восстановления активности мы попытались повысить эффективность чтения UAG тРНК supE .

    Таблица 1

    Генотипы и источники штаммов, используемых в настоящем исследовании

    Мы сконструировали библиотеку из вариантов тРНК supE путем рандомизации нуклеотидов в положениях 30-40, за исключением антикодоновой составляющей (положения 34, 35 и 36). ) (Рис. 1А). Клетки Dh20B трансформировали этой библиотекой вместе с мутантным геном cat с тремя кодонами UAG в рамке считывания [ cat (3amb)].Мы получили 18 клонов, растущих на чашке LB, содержащей Cm в концентрации 150 мкг / мл, тогда как родительская тРНК supE придает устойчивость к Cm от 150 до 200 мкг / мл. Затем определяли уровни устойчивости к Cm этих клонов, высевая их на чашки LB, содержащие Cm от 150 до 500 мкг / мл. Все они продемонстрировали более высокие уровни устойчивости к Cm, чем клетки, экспрессирующие тРНК supE (таблица 2), что позволяет предположить, что изолированные варианты supE тРНК транслируют UAG более эффективно, чем родительские.Анализ последовательности показал, что эти варианты содержат 13 различных последовательностей тРНК, но все они имеют U33, A37 и нуклеотиды 30 и 40 оснований, спаренные друг с другом; следовательно, эти три характеристики, вероятно, важны для эффективного декодирования UAG. Варианты 2, 3, 4, 5, 7, 9 и 11 обеспечивали самые высокие уровни устойчивости к Cm, а вариант 3 был идентичен родительской тРНК supE , за исключением замены U-на-A в положении 38 (рис. . 1А). Замена U38A присутствовала в шести вариантах с наивысшим рейтингом, за исключением варианта 2, и, вероятно, способствовала эффективному декодированию UAG.С другой стороны, варианты 4 и 7 больше всего отличались от исходной тРНК с шестью заменами оснований в восьми рандомизированных положениях. Мы решили использовать варианты 3 и 7, с наименьшим и наибольшим числом мутаций, соответственно, относительно родительской тРНК, чтобы добиться эффективной трансляции UAG в RFzero. Эти варианты получили обозначения supE3 и supE7 .

    Рис. 1

    Улучшение роста за счет повышения эффективности декодирования UAG в RFzero. (A) Вторичная структура немодифицированной тРНК supE .Нуклеотиды в коробках были рандомизированы. Указанное изменение U-A в положении 38 происходит в тРНК supE3 . Нуклеотиды пронумерованы в соответствии со стандартной системой нумерации тРНК. (B) Профили роста HST08 и RFzero-q, -q3 и -q7 в среде LB без антибиотика при 37 ° C. HST08 не поддерживает BAC7gent. (C) Вестерн-блоттинг продуктов gst (6amb) и gst (6gln) в штаммах RFzero-q. Продукты подвергали электрофорезу в SDS-полиакриламидном геле и затем окрашивали или детектировали с использованием антитела против GST.(D) Выходы продукта gst (6amb) в штаммах HST08 и RFzero по сравнению с выходами продуктов gst (6gln) в тех же штаммах.

    Таблица 2 Устойчивость к

    Cm, обеспечиваемая вариантами тРНК supE на Dh20B

    Введение supE3 в RFzero-q усиливает рост бактерий. RFzero-q ранее был создан путем нокаута prfA в штамме HST08, трансформированном с помощью плазмида BAC7gent, которая несла семь основных открытых рамок считывания с концом UAG, сконструированные таким образом, чтобы кончаться с UAA (18).Перед созданием штаммов RFzero, экспрессирующих выделенные варианты тРНК supE , мы сконструировали HST08 путем замены кодирующей последовательности supE в хромосоме последовательностями supE3 и supE7 для создания HST08-3 и HST08-7 соответственно (таблица 1). Замены были подтверждены секвенированием локусов glnX созданных штаммов.

    Мы исследовали уровни устойчивости к Cm HST08-3 и HST08-7, укрывающих cat (3amb).HST08-7 проявлял уровень устойчивости (от 10 до 17 мкг / мл Cm), аналогичный уровню устойчивости родительского штамма HST08, в то время как уровень устойчивости (50 мкг / мл Cm) HST08-3 был значительно выше. Это наблюдение предполагает, что тРНК supE3 транслирует UAG более эффективно, чем тРНК supE7 . Затем ген prfA был выключен в штаммах HST08-3 и HST08-7, каждый из которых трансформирован BAC7gent, для создания RFzero-q3 и RFzero-q7 соответственно. Нокаут был подтвержден секвенированием локусов prfA хромосом созданных штаммов.

    Мы сравнили скорость роста штаммов HST08 и RFzero-q, -q3 и -q7 в среде LB при 37 ° C. RFzero-q рос медленно по сравнению с родительским HST08, тогда как RFzero-q7 демонстрировал минимально улучшенный профиль роста (рис. 1B). С другой стороны, профиль роста RFzero-q3 был неотличим от профиля роста HST08, показывая благоприятный эффект мутации supE3 на пролиферацию клеток.

    RFzero-q3 транслирует UAG почти так же эффективно, как кодоны глутамина.Чтобы проверить, действительно ли эффективность декодирования UAG была улучшена в RFzero-q3 и -q7, мы трансформировали эти штаммы мутантным геном cat со всеми 13 кодонами глутамина, замененными на UAG или cat (13amb). Кошка дикого типа придавала устойчивость до 400 мкг / мл Cm HST08 и RFzero-q (таблица 3). RFzero-q и -q7 экспрессировали мутант cat (13amb) и проявляли устойчивость к Cm до 200 мкг / мл. С другой стороны, RFzero-q3 с cat (13amb) показал сопротивление Cm, почти такое же, как у дикого типа cat .Это наблюдение позволяет предположить, что эффективность трансляции UAG в RFzero-q3 почти равна эффективности трансляции кодонов глутамина.

    Таблица 3

    Рост штаммов RFzero-q, трансформированных генами cat на Cm-содержащих планшетах a

    Затем мы сравнили эффективность трансляции с UAG и кодоном глутамина CAG более количественно, в с точки зрения выходов репортерного белка в штаммах RFzero-q. Мы сконструировали мутантный ген глутатион S -трансферазы (GST), gst (6amb), несущий шесть триплетов UAG в рамке считывания в дополнительной последовательности на N-конце.Для сравнения мы сконструировали еще один ген gst , gst (6gln), который имел CAG вместо шести триплетов UAG. Экспрессию gst (6amb) и gst (6gln) оценивали электрофорезом в SDS-полиакриламидном геле и вестерн-блоттингом. В RFzero-q значительно меньшее количество полноразмерного GST было выражено из gst (6amb), чем из gst (6gln) (рис. 1C). С другой стороны, уровни экспрессии gst (6amb) и gst (6gln) были сходными в RFzero-q3, а уровень экспрессии gst (6amb) был немного ниже, чем у gst ( 6gln) в RFzero-q7.Выходы GST из RFzero-q3 были больше, чем из RFzero-q и -q7, потому что RFzero-q3 рос быстрее всего, с наибольшим выходом клеток на объем культуры.

    Количественно определяли выход продукта gst (6amb) по сравнению с выходом продукта gst (6gln), полученного из того же штамма, путем измерения активности GST в клеточных экстрактах (фиг. 1D). Ген gst (6amb) практически не экспрессировался в родительском штамме HST08, несущем интактный prfA . Нокаут prfA резко увеличил выход продукта gst (6amb) в RFzero-q, что дало относительный выход 29%.Эта доходность была удвоена в RFzero-q7 (59%) и утроилась в RFzero-q3 (89%), а выходы продуктов gst (6amb) и gst (6gln) были почти идентичны в RFzero-q3. Этот результат подтвердил наше утверждение о том, что RFzero-q3 транслирует UAG почти так же эффективно, как кодоны глутамина.

    Введение гена SucB , оканчивающегося на UAA, усиливает рост RFzero-q. Мы попытались определить факторы, участвующие в восстановлении роста RFzero-q3. Эффективное декодирование UAG должно способствовать трансляции в нижележащий регион UAG.Экспрессия продуктов гена с С-концевыми удлинениями должна иметь благоприятный эффект, поскольку эффективное декодирование UAG усиливает рост RFzero-q3. Ген SucB , кодирующий дигидролипоилтранссукциназу, является одним из генов-кандидатов с облегченной экспрессией, способствующей росту клеток (19). Хотя SucB не является ни существенным, ни одним из семи генов, сконструированных так, чтобы заканчиваться с UAA вместо UAG, он участвует в регенерации энергии, и его ORF заканчивается двумя последовательными тройками UAG.Следовательно, на экспрессию SucB может влиять эффективность трансляции UAG. Ранее мы сообщали, что введение SucB (UAA), гена SucB с UAA вместо двойного UAG, улучшило рост штаммов RFzero, транслирующих UAG в неприродные аминокислоты (19). Ожидалось, что ген sucB (UAA) будет продуцировать белок SucB с исходной длиной в RFzero. На рис. 2А показано, что введение SucB (UAA) также улучшило рост RFzero-q, хотя штамм все еще рос медленнее, чем RFzero-q3.Это наблюдение свидетельствует о том, что активность sucB отсутствует в RFzero-q и восстанавливается до некоторого уровня в RFzero-q3. Есть два других гена, оканчивающихся последовательными тройками UAG: nanC и ybjK . Введение nanC (UAA) не улучшило рост RFzero (19), тогда как ybjK с неустановленной функцией незаменим для роста клеток в богатой среде (Genobase, http: //ecoli. aist-nara .ac.jp / GB8 /).

    Рис. 2

    Облегченная экспрессия SucB способствует улучшенному росту RFzero-q3.(A) Профили роста в среде LB с ампициллином при 37 ° C для RFzero-q, несущего pBRsucB (UAA) (белые кружки) и RFzero-q (закрашенные кружки) и RFzero-q3 (ромбы), каждый из которых несет pBR322, пустой вектор. (B) Иллюстрация sucB и его вариантов, каждый N-конец помечен FLAG, в опероне sdhCDAB sucABCD и вестерн-блоттинг-анализ продуктов sucB из идентичных количеств клеток HST08 [ ΔsucB ], RFzero-q [ ΔsucB ] и -q3 [ ΔsucB ], каждый из которых несет опероны с указанными генами SucB .(C) Рост штаммов HST08, HST08 [ ΔsucB ] и HST08 [ ΔsucB ], трансформированных pBRsucB (UAA) и pBRsucB (CAG), на минимальных чашках с добавлением лизина и метионина или любой из аминокислот. В каждом ряду показаны серии разведений культуры клеток, инокулированной на планшеты.

    Клеточный уровень SucB выше в RFzero-q3, чем в RFzero-q. Мы сравнили уровни экспрессии SucB в RFzero-q и RFzero-q3. ORF SucB имеет второй стоп-кодон, UGA, 21 триплет ниже двойного UAG.Таким образом, в результате трансляции UAG образуется белок SucB с 23 дополнительными аминокислотами на С-конце. Чтобы сравнить размеры продуктов трансляции, мы сконструировали мутант sucB , sucB (CAG), с двумя кодонами глутамина CAG вместо двойного UAG и без изменений в последующей последовательности. Ген SucB транскрибируется как часть транскрипционной единицы, состоящей из sdhCDAB и SucABCD в указанном порядке (5). Во-первых, мы заменили кодирующую последовательность cat на ORF sucB в этом опероне, чтобы удалить ее из хромосом HST08, RFzero-q и RFzero-q3 и создать HST08 [ ΔsucB ], RFzero-q [ ΔsucB ] и RFzero-q3 [ ΔsucB ], соответственно (таблица 1).Затем весь оперон sdhCDAB SucABCD был клонирован в плазмиде с низким числом копий, а затем SucB был помечен пептидом FLAG на N-конце для создания плазмиды pApsucB. Число копий этой плазмиды ColIb-P9 составляет 1,7 на клетку (4). Ген sucB на этой плазмиде был дополнительно мутагенезирован до sucB (UAA) и sucB (CAG) для создания pApsucB (UAA) и pApsucB (CAG) соответственно. Эти плазмиды были введены в штаммы SucB -lacking HST08, RFzero-q и RFzero-q3.

    Вестерн-блот-анализ показал, что в HST08, SucB и SucB (UAA) экспрессировали генные продукты того же размера в аналогичных количествах, тогда как SucB (CAG) экспрессировали более длинный продукт на значительно более низком уровне (Рис. 2B, дорожки с 1 по 3). В RFzero-q SucB экспрессировал только расширенный продукт с такой же длиной, как и у продукта SucB (CAG) (фиг. 2B, дорожки 4 и 6). Это наблюдение показало, что трансляция не останавливается на UAG, достигая второй тройки остановок.Уровни экспрессии расширенных продуктов были значительно ниже, чем у SucB (UAA). RFzero-q3 также экспрессировал только расширенный продукт из sucB , и его уровень экспрессии был в 2 раза выше, чем в RFzero-q (фиг. 2B, дорожка 7). Уровень продукта SucB (CAG) был немного повышен по сравнению с его производством в RFzero-q (фиг. 2B, дорожка 9).

    Более высокий уровень SucB в RFzero-q3, вместе с благоприятным эффектом введения SucB (UAA), убедительно свидетельствует о том, что облегченная экспрессия расширенного белка SucB способствует усилению роста RFzero-q3.Затем мы проверили, сохраняет ли этот расширенный белок свою активность. Сообщается, что нокаут sucB в E. coli вызывает ауксотрофию по лизину и метионину (7). Удаление лизина или метионина из среды фактически нарушило рост HST08 [ ΔsucB ], а введение sucB (UAA) восстановило рост (рис. 2C). Введение SucB (CAG) также имело такой же эффект, показывая, что расширенный продукт сохраняет свою активность.

    Остановка рибосом в RFzero-q разрешена в RFzero-q3.Мы исследовали, вызывает ли неэффективная трансляция UAG задержку рибосом в UAG в отсутствие RF-1. Если это произойдет, то ожидалось, что остановка будет серьезной при двойном UAG SucB в RFzero-q и будет уменьшена в RFzero-q3. Мы проанализировали влияние фактора рециклинга рибосом на экспрессию SucB в штаммах RFzero. Ген yaeJ кодирует фактор гидролиза пептидил-тРНК и, как сообщается, может компенсировать недостаточный путь ssrA (6), который является основным путем восстановления застопорившихся рибосом.В отличие от пути ssrA , полипептиды, высвобождаемые из рибосом за счет функции yaeJ , не предназначены для деградации и, таким образом, могут быть обнаружены. Ген yaeJ под контролем сильного промотора был клонирован в pApsucB и введен в RFzero-q [ ΔsucB ] и RFzero-q3 [ ΔsucB ]. Таким образом, в RFzero-q [ ΔsucB ] были обнаружены два продукта SucB , и их длина была идентична длине продуктов SucB (UAA) и SucB (CAG) соответственно (рис.3А). Обнаружение белка SucB с исходной длиной убедительно свидетельствует о том, что рибосомы фактически остановились на UAG в конце SucB в RFzero-q и что YaeJ, вероятно, разрешил остановку и «спас» белок SucB, минуя ssrA путь. С другой стороны, белок SucB с исходной длиной не был обнаружен в RFzero-q3 (фиг. 3A), показывая, что облегчение остановки рибосом в этом штамме, вероятно, было связано с эффективной трансляцией UAG.Сверхэкспрессия yaeJ в RFzero-q улучшает профиль роста (Fig. 3B), что убедительно указывает на то, что остановка рибосом является еще одним фактором, вносящим вклад в медленный рост RFzero-q. Усиление роста наблюдалось только после поздней логарифмической фазы, и, таким образом, yaeJ , по-видимому, влияет на клетки, входящие в стационарную фазу. С другой стороны, введенный SucB (UAA) оказал свое влияние, начиная с фазы середины логарифма (рис. 2A).

    Рис. 3

    Закупорка рибосом облегчается за счет yaeJ .(A) Вестерн-блоттинг-анализ экспрессии FLAG-tag excB в штаммах RFzero-q [ ΔsucB ] и RFzero-q3 [ ΔsucB ], каждый из которых трансформирован pApsucB-yaeJ, pApsucB (UAA) -yaeJ и pApsucB (CAG) -yaeJ. Количество клеток, несущих SucB (UAA), используемых для анализа, было меньше, чем количество клеток, несущих два других гена. (B) Профили роста штаммов RFzero-q, трансформированных пустым вектором (pAp105) (белые кружки) и pApyaeJ (темные кружки) в LB с канамицином при 37 ° C.

    Спонтанная мутация в гене тРНК улучшает рост штамма RFzero. Чтобы поддержать наше утверждение о том, что пагубный эффект переназначения UAG может быть уменьшен за счет увеличения эффективности декодирования UAG, мы охарактеризовали спонтанную мутацию, происходящую в штамме RFzero, который улучшил рост клеток. Исходный штамм RFzero, обозначенный как RFzero-py (таблица 1), основан на BW25113, штамме E. coli K-12. Трансляция UAG в RFzero-py включает экспрессию архейной пары пирролизиновой тРНК и варианта пирролизил-тРНК синтетазы (PylRS), присоединяющего производные лизина к тРНК (19).Рост RFzero-py требует добавления одной из этих производных в среду, и скорость роста зависит от добавок. Следовательно, мы можем создать условия, в которых RFzero-py может плохо расти, добавляя плохой субстрат для варианта PylRS. Культура клеток достигла оптической плотности 0,3 при 600 нм (OD 600 ) за ночь, и она оставалась при этой плотности еще два дня. Плотность клеток подскочила до OD 600 1,6 на четвертый день, хотя в среду не было добавлено никаких мутагенных химикатов.Мы выделили восемь клонов из конечной культуры и обнаружили, что все они могут расти так же быстро, как родительский штамм prfA + , достигая OD 600 , равного почти 3 за ночь. Рост этих штаммов больше не зависел от добавления производных лизина, что свидетельствует о том, что они либо восстанавливали способность прекращать трансляцию в UAG, либо изменяли назначение UAG определенной аминокислоте в среде.

    Мы использовали репрезентативный клон, обозначенный RFzero *, для экспрессии GST с янтарным кодоном в кадре.Этот мутантный ген gst и другой ген, лишенный UAG в рамке считывания, экспрессировались в RFzero * на аналогичных уровнях (данные не показаны), что позволяет предположить, что штамм не восстанавливает способность прекращать трансляцию в UAG. Продукт мутанта amber gst расщепляли трипсином и анализировали масс-спектрометрией. Наблюдаемая средняя масса пептида, охватывающего положение UAG, соответствовала теоретическому значению ( m / z = 1277,7) соответствующего пептида с лейцином или изолейцином в UAG.Эти результаты показали, что UAG эффективно транслируется в одну из этих аминокислот в RFzero *.

    Анализ последовательности показал, что кодирующая последовательность RF-1 все еще отсутствовала в локусе prfA RFzero *, и не было мутации в prfB , кодирующей RF-2. Этот фактор высвобождения распознает UAA и UGA, а мутация в prfB может изменить кодонную специфичность фактора, позволяя ему распознавать все три стоп-триплета (12). Отсутствие мутации в prfB согласуется с эффективной экспрессией мутантного гена amber gst , что окончательно отрицает возможность восстановления RFzero * активности для прекращения трансляции в UAG.Мы секвенировали гены тРНК Leu из RFzero * и обнаружили, что вторая буква антикодона тРНК 5 Leu была изменена, и его кодоновая специфичность была преобразована с UUG в UAG. Эта мутация идентична ранее описанной мутации supP , а тРНК supP является эффективным супрессором янтаря (33). Мы пришли к выводу, что мутация supP произошла в RFzero-py и приняла на себя трансляцию UAG из архейных молекул, неэффективно переводя UAG в производное лизина.Появление быстрорастущего RFzero с supP снова указывает на то, что эффективная трансляция UAG оказывает благоприятное влияние на рост штамма prfA -lacking.

    Мутант prfB , допускающий нокаут prfA , распознает UAG. Ген prfA был недавно нокаутирован в штамме E. coli с уменьшенным количеством триплетов UAG и UAA в хромосоме меньшего размера на 15% (14). В отличие от RFzero, этот нокаут prfA не зависел от экспрессии тРНК, декодирующей UAG, но требовал мутации Ala-to-Glu в положении 293 «фиксированного» гена prfB .Поскольку мутация сдвига рамки считывания и замена Ala246Thr естественным образом встречаются в prfB , они были удалены, чтобы «исправить» ген до нокаута prfA . Тройной мутант prfB , prfB *, позволял нокаутному штамму prfA активно расти. Поскольку он не смог дополнить чувствительную к температуре мутацию prfA в другом штамме (14), prfB *, по-видимому, не смог распознать UAG. Чтобы прояснить основу различных требований для нокаута prfA , мы охарактеризовали prfB * в штаммах RFzero.Во-первых, мы выполнили тест комплементации с использованием RFzero-iy, штамма RFzero, переводящего UAG в 3-йодтирозин (таблица 1). Активность тРНК, декодирующей UAG, в RFzero-iy строго зависит от присутствия 3-йодтирозина, и удаление этой аминокислоты из среды «инактивирует» тРНК, что приводит к ингибированию роста (рис. 4A). RFzero-iy трансформировали плазмидами pApnPrfB * и pApkPrfB *, каждая из которых несла prfB *. Предполагалось, что первая плазмида, pApnPrfB, будет экспрессировать prfB * из своей нативной вышестоящей последовательности, тогда как pApkPrfB * несет ген prfB * ниже гена устойчивости к канамицину. С любой плазмидой трансформированный RFzero-iy больше не требовал 3-иодтирозина (фиг. 4A). Это наблюдение показало, что prfB * может дополнять отсутствие тРНК, декодирующей UAG.

    Рис. 4

    UAG-распознающая активность prfB *. (A) Рост штаммов RFzero-iy, трансформированных пустым вектором pAp105 и плазмид pApkPrfB * и pApnPrfB *, каждая из которых экспрессирует prfB *, на чашках LB с канамицином при 37 ° C с 3-йодтирозином (0,1 мг / мл) ( + IY) и при его отсутствии (−IY).(B) Вестерн-блоттинг экспрессии гена слияния Trx-GST в RFzero-q3, трансформированном pAp105 (дорожка 1), pApkPrfBf (дорожка 2), pApkPrfB * (дорожка 3), pApnPrfBf (дорожка 4) и pApnPrfB * (дорожка 5) ). Отмечены размеры, соответствующие размерам Trx-GST и Trx. Обнаружение продуктов проводили с использованием антитела против метки His, которое вставляли между С-концом Trx и UAG в рамке считывания.

    Затем мы проанализировали экспрессию гибридного гена тиоредоксина (Trx) и GST в этом порядке, с триплетом UAG, расположенным между ними. Этот гибридный ген экспрессировал только полноразмерный гибридный белок в RFzero-q3, который транслирует UAG в глутамин (рис. 4B, дорожка 1). Полноразмерный белок снова был единственным продуктом в штамме RFzero-q3, трансформированном «фиксированным» геном prfB , который экспрессировался из pApkPrfBf или pApnPrfBf (фиг. 4B, дорожки 2 и 4). Наконец, небольшое количество короткого продукта с размером, соответствующим тиоредоксину, было обнаружено в RFzero-q3, трансформированном с помощью prfB * (рис. 4B, дорожки 3 и 5), что убедительно свидетельствует о том, что некоторые раунды трансляции завершились. на UAG вместо включения глутамина в ответ на триплет.Это наблюдение вместе с результатами теста комплементации показывает, что RF-2 с мутацией A293E может распознавать UAG и прекращать трансляцию. Однако его активность, вероятно, слишком слаба, чтобы комплементировать мутант prfA (Ts).

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Как смысловой кодон, триплет UAG не будет так эффективно транслироваться, как другие смысловые кодоны, пока характеристики декодирующей тРНК и родственных ей aaRS не будут оптимизированы для UAG. В настоящем исследовании мы показали, что генетическое изменение тРНК, считывающей UAG, обеспечивает эффективную трансляцию триплета в отсутствие RF-1.Изолированная тРНК supE3 с заменой U-на-A в положении 38 идентична ранее описанной тРНК-супрессору янтаря Gln (2). Аналогичное изменение, замена C-на-A в положении 38, как сообщается, улучшает эффективность декодирования UGA супрессорной тРНК опала Glu (24). U в положении 38, который является инвариантным между двумя видами тРНК Gln E. coli, участвует в узнавании тРНК Gln с помощью GlnRS (25), и изменение U-to-G в этом положении умеренно снижает аминоацилирующая активность тРНК Gln (13).Следовательно, эффективная трансляция UAG с помощью тРНК supE3 , вероятно, обусловлена ​​повышенной способностью распознавать UAG. Когда UAG переназначается на неприродные аминокислоты, присоединение этих новых субстратов к тРНК может быть ограничивающим шагом, и, вероятно, необходимо создать aaRS, благоприятствующие этим аминокислотам, для достижения эффективной трансляции UAG.

    Анализ экспрессии SucB в RFzero выявил эффекты переназначения UAG на молекулярном уровне.Во-первых, только расширенный продукт экспрессировался из ORF SucB . Во-вторых, расширенный продукт сохранил свою активность, вероятно, способствуя росту бактерий, хотя его экспрессия была значительно снижена. Это снижение уровня экспрессии можно объяснить, если предположить, что добавление дополнительного С-концевого пептида дестабилизирует белок или что развитие трансляции за пределы исходного стоп-триплета дестабилизирует мРНК. В-третьих, когда декодирование UAG неэффективно, остановка рибосом происходит в двойном UAG на конце SucB и, вероятно, на концах других ORF, заканчивающихся UAG, на более низких уровнях, таким образом затрудняя общую трансляцию, предотвращая повторное использование рибосом.Повышенная эффективность декодирования UAG не только облегчает производство расширенного SucB, но также, вероятно, увеличивает общую трансляционную активность за счет разрешения застопорившихся рибосом. Последний эффект может объяснять слегка повышенную экспрессию SucB (CAG), которая конкретно не включает трансляцию UAG.

    Среди ∼300 ОРС с концом UAG, sucB , вероятно, не единственный ген с расширенным продуктом, который сохраняет свою активность и способствует росту бактерий.Вклад этого гена относительно велик и сильно ограничен наличием двойного UAG, поэтому его было легче идентифицировать. Наблюдение за усиленным ростом RFzero-q3 в богатой среде не отменяет возможности того, что некоторые из расширенных продуктов могут иметь неблагоприятные эффекты при определенных обстоятельствах. Например, эффективное подавление янтаря в конце relA , которое, вероятно, генерирует расширенный продукт, по сообщениям, нарушает механизм строгого контроля для ответа на аминокислотное голодание (3).Переназначение UAG, вероятно, имеет смешанный эффект, и общий результат может отличаться в разных средах. Возможное преимущество RFzero состоит в том, что в штамме есть только два типа стоп-триплетов, что значительно снижает частоту нежелательных нонсенс-мутаций по сравнению с таковой у штаммов дикого типа, использующих универсальный код. RFzero может воспользоваться преимуществами таких обстоятельств, как увеличение скорости мутаций, а штамм может извлечь выгоду из высокой скорости мутаций для быстрого развития.

    Настоящие результаты объясняют потребность в тРНК, декодирующей UAG, для нокаута prfA , при этом триплеты UAG остаются нетронутыми в хромосоме. Активность по декодированию UAG, вероятно, необходима для облегчения остановки рибосом на UAG и для обеспечения экспрессии ORF, заканчивающихся UAG. Идентичность аминокислоты, которая должна быть включена в UAG, не важна, потому что появление тРНК, эффективно включающей глутамин или лейцин в UAG, обеспечивает энергичный рост RFzero, а UAG даже был назначен неприродным аминокислотам.С другой стороны, появление второго стоп-триплета, UAA или UGA, ниже UAG является неявным условием, необходимым для нокаута prfA : это позволяет экспрессию ORF, заканчивающихся UAG, в отсутствие RF-1. Эти «резервные» стоп-триплеты также играют решающую роль при повышении эффективности трансляции UAG: они предотвращают достижение рибосомами конца мРНК. Около половины (42%) триплетов UAG в геноме E. coli имеют UAA или UGA в пределах 10 триплетов после UAG. Этот процент значительно превышает ожидаемый (27%), если они возникают случайно (18).Частота возникновения резервных остановок резко контрастирует с частотой появления второго UAG после UAG; только 8% триплетов UAG имеют второй UAG в пределах 10 триплетов, тогда как цифра, ожидаемая от случайного появления, составляет 15%. Эти статистические данные предполагают, что UAA и UGA могли появиться как резервные остановки ниже по течению от UAG, в то время как UAG исчезает в то же время, чтобы избежать пагубного воздействия ситуации, когда UAG в основном не может завершить трансляцию.Сообщается, что ядерные геномы дрожжей и инфузорий также имеют эту резервную систему (1, 17).

    Две гипотезы о естественно установленных переназначениях кодонов, а также две недавние попытки нокаутировать prfA , все предполагают существенное изменение в геномном использовании переназначенных кодонов.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *